Vyhledat témata bez odpovědí | Zobrazit aktivní témata Právě je pát 29. bře 2024 10:27:35



Odpovědět na téma  [ Příspěvků: 279 ]  Přejít na stránku Předchozí  1 ... 24, 25, 26, 27, 28  Další
 Množení semeny (in-vitro) 
Autor Zpráva
Moderátor

Registrován: stř 30. črc 2008 13:04:11
Příspěvky: 1228
Bydliště: Brno
Příspěvek Re: Množení semeny (in-vitro)
cheron,
je těžké přesně na dálku odhalit problém s klíčením nebo umrtím protokormů. Přesně to nesleduji ale co je vyseto? Cymbidium nebo Dendrobium nebo ? Jasně, každý agar je jiný takže jen doporučení v g. Říkám stále je třeba vychladit a zkusit prstem !
Jen pár otázek, kolik jste dal Orchimaxu na litr? Podle návodu na krabici? Máte ventilaci na flašce? Neměla flaška s protokormy kontaminaci? Může se objevit ne plíseň ale zakalená voda na povrchu což je nenápadná bakterióza ale spolehlivě ničící všechny protokormy. Po otevření flašky to docela smrdí. Děláte flašky jak? V boxu, nad párou, nebo ? Takže bych neztrácel hlavu po prvním neúspěchu. Je třeba prověřit všechny kroky!


čtv 19. bře 2020 18:49:30
Profil
Moderátor

Registrován: stř 30. črc 2008 13:04:11
Příspěvky: 1228
Bydliště: Brno
Příspěvek Re: Množení semeny (in-vitro)
cheron,
ještě bych rozebral ty nevyklíčená semena. Jsou to stejná semena jak ty první klíčící ? Nebo jsou to jiná? Kontroloval jste jestli mají semena jádra? Některá semena mohou klíčit i za několik měsíců.


čtv 19. bře 2020 19:02:54
Profil

Registrován: stř 28. říj 2015 19:16:45
Příspěvky: 1003
Příspěvek Re: Množení semeny (in-vitro)
Jasné, že na diaľku sa zlé radí ...
Skôr ma zaujíma, ako kto vysieva na Orchimax.

Prenášal som protokormy R. citriny, Sedir. japon. a kríženec Phalu (obchoďák x Samera) práve na 100% Orchimax. Tu sa ospravedlňujem za isté zavádzanie - nezašlo to hneď po 2 týždňoch (to sa začali objavovať náznaky poškodenia), ale po cca 6 týžd. som to už ukončil a vyhodil. Všetko to predtým naklíčilo na domácom médiu a žiadna kontaminácia nebola prítomná.
Tá sa vyskytla akurát u výsevu - niečo cca po týždni, niečo po 40 dňoch. Väčšinou Phaly klíčia za 20-30 dní, resp. je vidieť, že semená (ako ja tomu "odborne" hovorím) "bobtnajú". V tomto prípade nebobtnali.
Sedir. j. a kríž. Phalu so Samerou boli posledné semená, takže s tými som už pokus nemohol zopakovať. Opakoval som ale R. citr. na 1/2 Orchimaxe a nenaklíčila. A ešte tu mám výsev R. citr. od januára na Orchimaxe, ale s celkovou koncentráciou 400 uS a tiež nič.
Ešte 1 príklad - hybr. veľkokvetého bielého Phalu a equestrisu - na domácom médiu klíčenie v pohode, na 1/2 Orchimaxe nič.
Ďalší výsev na Orchimax v celk. koncentrácii spolu s kokos. vodou 970 uS + prenos protokormov z domáceho média (biely hybr. x equestris) som robil min. týždeň (14.3.) tak uvidíme ...

Agar skúšam samozrejme po vychladení vždy ;) Pre meranie pH musím médium "rozbiť", takže tuhosť kontrolujem. A ako som spomínal, dávam menšie dávky agaru, takže média mám mäkšie ...

Pri prvom varení Orchimaxu som dodržal predpísanú dávku - 27,28 g/L. Ventiláciu mám - používam 3M micropore pásku zvnútra i zvonku, teda 2 vrstvy. Ako som už spomínal - u protokormov nebola prítomná žiadna kontaminácia - ani pleseň, ani bakterióza, ani nič iné ;) Vysievam v uzavretom boxe, kde odsávam vzduch vysávačom a na druhej strane mám hepa filter 13. Sterilizujem pomocou zdravotníckeho ISORAPID Spray-u - rýchly a max. účinný. Ak sa vyskytnú kontaminácie, tak je to s najväčšou pravdepodobnosťou z nedostatočnej dezinfekcie semien. Používal som 3% peroxid cca 10 min., ale pridal som v poslednej dobe k tomu následne ešte 10x riedené Savo cca 2 min. Samozrejmosťou je dôkladné prepláchnutie čistou vodou (3-4x).
Hlavu nestrácam - nie je to prvý neúspech. Venujem sa tomu cca od r. 2016 s tým, že postupne naberám skúsenosti a prax ;) Mám už aj prvé výsledky (viď foto).

Čo sa týka kontroly jadier semien - priznávam, že o tom som doteraz nepočul. Ako sa to robí ? Zrejme pod mikroskopom, ktorý ale aj tak nemám ...
To, že niektoré semená môžu klíčiť aj po niekoľkých mesiacoch viem. U Phalov je to väčšinou do mesiaca (aspoň podľa mojich skúseností). Mal som výsev na médiu aj 2-3 mesiace a nič. Ale boli to domáce média, kde je často problém ustrážiť stále pH - časom totiž stúpa nad 6.

Každopádne ďakujem za reakciu a pripomienky ;)


Přílohy:
IMG_20200320_102357.jpg
IMG_20200320_102357.jpg [ 192.46 KiB | Zobrazeno 8673 krát ]
IMG_20200222_165104.jpg
IMG_20200222_165104.jpg [ 198.32 KiB | Zobrazeno 8673 krát ]
pát 20. bře 2020 12:26:27
Profil

Registrován: stř 28. říj 2015 19:16:45
Příspěvky: 1003
Příspěvek Re: Množení semeny (in-vitro)
Citace:
Ďalší výsev na Orchimax v celk. koncentrácii spolu s kokos. vodou 970 uS + prenos protokormov z domáceho média (biely hybr. x equestris) som robil min. týždeň (14.3.) tak uvidíme ...


Výsledky sa dostavili ...
Z výsevu som robil R. citr. x self (nič neklíči), P. Samera x P. equestris (nič neklíči), P. equestris x self (žiaľ kontaminácia) a Neof. falcata x self (taktiež kontaminácia).
Z prenesených protokormov (Phal. biely hybr. x equestris) žiaľ tiež nič neostalo. Najprv rástli a potom zosklovateli :? Vôbec tomu nerozumiem. Prečo to na Orchimaxe neklíči, príp. po prenesení hynie ?
pH média pred varením 5,6/ po uvarení 5,9/ dnes pri ukončení 5,7 (u prenesených protokormov)/ 6 u kontrolného média.

Vraj neriešiť vodivosť u média ... Ale ak není problémom vodivosť ani pH, tak čo potom ?
Na domácom médiu to klíči, rastie a na komerčnom nič ? Veď to by malo byť "vyladené" čo sa živín týka a naviac drží parádne pH, čo je u domácich médii problém.

Toto vlákno je zobrazené 3517 krát (v čase, keď píšem tento príspevok), takže záujem o výsevy je značný.
Vážne tu nikto (okrem virensa) nevysieva na Orchimax ? Nejaké info, či vám to klíči, rastie, príp. nejaké iné postrehy, skúsenosti, rady ?


Přílohy:
IMG_20200501_152306.jpg
IMG_20200501_152306.jpg [ 194.29 KiB | Zobrazeno 5151 krát ]
sob 02. kvě 2020 14:36:45
Profil
Moderátor

Registrován: stř 30. črc 2008 13:04:11
Příspěvky: 1228
Bydliště: Brno
Příspěvek Re: Množení semeny (in-vitro)
cheron,
přiznám se , že jsem neměl dlouho čas abych to nějak rozebíral ale podívám se na předešlý příspěvek. určitě se najde možnost sjednotit postupy aby to odpovídalo "normálu" . Jaro je pro mne drsné období. :(


sob 02. kvě 2020 17:06:52
Profil
Moderátor

Registrován: stř 30. črc 2008 13:04:11
Příspěvky: 1228
Bydliště: Brno
Příspěvek Re: Množení semeny (in-vitro)
cheron,
začneme postupně.
1, zkuste sterilizaci semen SAVEM . SAVO original - účinná látka chlornan sodný 47g na kg (červený vršek)
2, léty ověřené doby sterilizace semen. 5% 5ml SAVA a 95ml dest. vody + nepatrné množství Jaru 1/10 kapky.Namočím do Jaru špendlík a zamíchám. Na sterilizaci stačí (pokud semeník není dlouho otevřený-- den dva) -- začínám na 9 minutách 12, 15 min.
Navyšuji po 3 minutách. Pokud je semeník z přírody a otevřený dostanete se na 10% a časy mohou být až 40, 50, 60 minut. Nejhorší je uchovat semeník v igelitovém sáčku. Je to takřka nepoužitelné. Houby a jiný bord..l prorostou do jader a pokud se podaří vysterilizovat jádro obyčejně už neklíčí. Semena protřepávat v roztoku po pár minutách.
3, Po vysterilizování semena NEOPLACHUJI ale dávám je přímo na agar. Na agar dávám semena takřka suchá , vytlačené Savo dávám do nádobky. Všechny součásti s kterými pracuji dávám před prací do nádoby se Savem na půl hod. Koncentrace 400ml vody a 100ml Sava. + Jar. Vysterilizovat dávám špachtličky, pinzety inj. stříkačku, zátky do nich a vnitřek plastové stříkačky.
Měl bych dát fotku ale nemám. V boxu pak nasypu do stříkačky prosátá semena přes jemné sítko (malé kuchyňské) Oddělí se hrubší nečistoty ze semeníku a na papíře A4 zůstanou jen semena. Ty kontroluji pod binokulárem x 40 ale stačí i zvětšení 10 nebo 20 x . V bazarech se dá koupit čočka do mikroskopu ( v číně nové za pár korun) a ze vzdálenosti cca 2 cm je krásně vidět jestli tam jsou jádra nebo ne. Včera jsem v krásném semeníku nenašel ani jedno jádro. Přesto jsem to vysel. Někdy se stane, že přeci se najde třeba 20 semen s jádrem. Někdy však nic.
https://www.ebay.com/itm/Achromatic-Obj ... 0005.m1851


sob 02. kvě 2020 18:05:10
Profil

Registrován: stř 28. říj 2015 19:16:45
Příspěvky: 1003
Příspěvek Re: Množení semeny (in-vitro)
Donedávna som používal len 3% peroxid a bolo to v pohode - 90+% bez kontaminácii. Poslednou dobou som začal pridávať savo po peroxide v dávke 10%/2min. a následne dôkladne prepláchnem čistou vodou. Píšete, že Vy sám používate 5%/9-15 min. (bez preplachu) a že sa možno dostať až na 10%/60min. - skúšal ste to už niekedy ? Vyklíčilo niečo ? Jar používam tiež.
Inak, čo sa týka sava - prikladám výstrižok z jednej štúdie o dezinfekcii semien savom. Použitá bola koncentrácia 0,4 a 0,8% Ako možno vidieť, ideálny čas pôsobenia je 5 min., lebo klíčivosť s pribúdajúcim časom značne klesá.

Ďakujem za odkaz na binok. šošovky.

Skôr ma zaujíma príčina, prečo semená neklíčia na Orchimaxe, keď na domácom médiu klíčia a prečo po prenesení protokormov na Orchimax po cca mesiaci hynú, aj keď spočiatku rastú.


Přílohy:
Screenshot_2020-05-03 Untitled-1 - chlornan sodny sterilizacia pdf.png
Screenshot_2020-05-03 Untitled-1 - chlornan sodny sterilizacia pdf.png [ 65.82 KiB | Zobrazeno 5024 krát ]
ned 03. kvě 2020 9:51:29
Profil
Moderátor

Registrován: stř 30. črc 2008 13:04:11
Příspěvky: 1228
Bydliště: Brno
Příspěvek Re: Množení semeny (in-vitro)
cheron,
taky jsem používal peroxid ale nebyl jsem s ním spokojený. Kontaminace bylo dost. Měl jsem podobnou tabulku jak vy ale hodnoty tam nejsou stejné. Ty koncentrace jsou nízké a doba dlouhá a myslím, že je to jen na semena naprosto nekontaminovaná. Můj extrém 10% a 40, 50 , 60. je poslední pokus jak dostat z drsně kontaminovaného semeníku aspoň něco.
Vím , že to většinou už fakt neplesnivý ale nepřežije nic nebo několik semen. Používám jednou za několik let. Nedávno na jeden semeník z přírody a čekám jak to dopadne. Poslední pokus.
Vybral jsem si koncentraci takovou kdy mám při tomto procesu čas na práci kolem toho. Čas 2 min. je tak krátký, že s tím nestihnete ani pořádně zatřepat. Proč zdechnou protokrmy po přepíchání nedokáži odhadnout ale zkuste zvětšit větrání.
Nejraději používám zelený semeník protažený 20% savem (10 min) a opláchnutý v denatur. lihu a zapálený. Sterilně rozříznu a sypu přímo do flašky.
Nejsem si jist, 0,8% NaCl asi bude zcela jiná koncentrace než SAVO kde je 47g na kg (ani nevím jak to počítají) kde se to pak dále ředí. Vycházel jsem podle jiné tabulky (Arditti) a to tehdy nebyl žádný internet :lol: ale publikace z vědecké knihovny.


ned 03. kvě 2020 10:52:11
Profil
Moderátor

Registrován: stř 30. črc 2008 13:04:11
Příspěvky: 1228
Bydliště: Brno
Příspěvek Re: Množení semeny (in-vitro)
Tvary semen s jádry


Přílohy:
doc1.doc tvary semen.doc [1 MiB]
257 krát
ned 03. kvě 2020 11:26:47
Profil

Registrován: stř 28. říj 2015 19:16:45
Příspěvky: 1003
Příspěvek Re: Množení semeny (in-vitro)
Semená nechávam pred výsevom cca 24 hod. namočené vo vode s cukrom. Pred samotným výsevom vodu vytlačím a naberiem peroxid s jarom, uložím do boxu a box so všetkým, čo sa v ňom nachádza vydezinfikujem. Medzi tým samozrejme semena pár krát premiešam. Následne vytlačím peroxid, prepláchnem trochu vodou a naberiem savo - 2 min. nechávam preto, lebo používam 10%. Premiešam, poriadne prepláchnem čistou vodou, vodu vytlačím a ponechám tak na 1 - 2 kvapky, aby som nakvapkal semena priamo zo striekačky. Pomocou špachtličky rovnomerne rozotriem po agare.

Čo sa týka koncentrácie sava, tak pri dávke 47g/L je to 4,7 % chlornanu. Ak chcete dostať dávku 0,8% treba zmiešať 0,8 ml sava a 99,2 ml vody (ak som to dobre spočítal - matika nie je mojou doménou :D ). Môžete si to prepočítať tu: https://www.labo.cz/mft/koncentrace.php?offline=ano

Zelený semenník som použil asi 2x - neviem, ale mám proste radšej dobre zrelé smená. Keď semenník zožltne, ustrihnem ho a nechám na prehnutom papieri uschnúť - keď praskne, dobre z neho vyklepem semená, ktoré následne nasypem do mikro skúmavky - tú vložím do malej zatváracej skleničky s hydroxidom (miesto silicagelu) a nechám v chladničke pár dní vysušiť. Potom dávam semená do mrazaku.
Prvý výsev robím samozrejme z "čerstvých" semien (nemrazených). Zbytok mrazím kvôli tomu, aby v prípade neúspechu som mohol výsev opakovať. V opačnom prípade by som musel robiť semenník znovu a čakať 1/2 roku na ďalšie semená.


ned 03. kvě 2020 11:55:34
Profil
Zobrazit příspěvky za předchozí:  Seřadit podle  
Odpovědět na téma   [ Příspěvků: 279 ]  Přejít na stránku Předchozí  1 ... 24, 25, 26, 27, 28  Další

Kdo je online

Uživatelé procházející toto fórum: Žádní registrovaní uživatelé a 3 návštevníků


Nemůžete zakládat nová témata v tomto fóru
Nemůžete odpovídat v tomto fóru
Nemůžete upravovat své příspěvky v tomto fóru
Nemůžete mazat své příspěvky v tomto fóru
Nemůžete přikládat soubory v tomto fóru

Hledat:
Přejít na:  
cron